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GST标签蛋白高速纯化树脂图片
产品货号:
SY0396
中文名称:
GST标签蛋白高速纯化树脂
英文名称:
gStar Glutathione Agarose Resin 4FF
产品规格:
10ml|50ml|100ml|1L
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是一种GST标签蛋白纯化树脂,结构上是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。


本制品特异性好,性价比高,可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。




基质高度交联的4%琼脂糖微球
配体通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽
粒径45~165μm
载量>10mg GST protein/mL基质(40kDa)
最大压力0.3 MPa,3 bar
pH稳定范围3-12
储存缓冲液20%乙醇



组分10mL50mL100mL1L
GST标签蛋白高速纯化树脂10mL50mL100mL1L
说明书1份

保存:2~8℃,有效期2年。


  • 所用水和Buffer在使用前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤除菌。
  • 结合/洗杂缓冲液:PBS,pH7.4(140mM NaCl,2.7mM KCl,10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4,pH7.4)
  • 洗脱缓冲液:50mM Tris-HCl,10mM还原型谷胱甘肽,pH8.0
    注:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1~10mM DTT。



  • 请勿冷冻保存本制品。
  • gStar Glutathione Agarose Resin使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。
  • 所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  • 本制品仅作科研用途!



样品在上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。
  • gStar Glutathione Agarose Resin 4FF的装填(适用于各种中压色谱层析柱的填装)
    • 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。
    • 将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
    • 如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
    • 打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速,这样可避免液压对所形成柱床的冲击,避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用所使用泵的最大流速,这样也可以得到一个很好的装填效果。
      注:在随后的色谱程序中,不要超过最大装柱流速的75%,当柱床高度稳定后,在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
    • 关闭泵,关闭层析柱出口。
    • 如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。
    • 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。
    • 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。
  • 样品纯化
    • 平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
    • 上样:Resin平衡后,加入蛋白样品,使其与Resin充分接触,提高目的蛋白回收率,收集流出液。
    • 洗杂:用10~15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
    • 洗脱:使用5~10倍柱体积的洗脱缓冲液,收集洗脱液,即目的蛋白溶液。
    • 清洗与保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。
  • SDS-PAGE检测
    将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
  • 填料清洗
    GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。
    • 去除一些沉淀或变形物质
      用2倍柱体积的6M盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。
    • 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
      用3~4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH7.4清洗。



问题可能原因推荐解决方案
柱子反压过高填料被堵塞清洗树脂
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,或离心去除
样品太黏稠样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5μg/mL),Mg2+(终浓度1mM),冰上孵育10~15min
缓冲液太黏稠有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速
洗脱组分中无目的蛋白GST标签蛋白变性了使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准
过度的裂解使目的蛋白变性
目的蛋白聚集产生沉淀在细胞裂解前溶液中加入DTT,终浓度为1~10mM
融合蛋白改变了GST的构象,影响了目的蛋白的结合力测定pGEX中GST的结合力,对载体进行超声处理,检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力,有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力
降低结合温度至4℃,充分清洗
柱子平衡时间太短,目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范围内结合用pH6.5-pH8.0的buffer进行充分的平衡,如PBS
目的蛋白没有完全洗脱下来洗脱体积太少增加洗脱液体积,减小洗脱流速。
洗脱液中谷胱甘肽浓度太低增加洗脱液中谷胱甘肽浓度,可尝试用50mM Tris-HCl,20~40mM还原型谷胱甘肽pH8.0洗脱
低pH影响洗脱在不增加洗脱液中谷胱甘肽量时,提高洗脱液中pH至pH8~9会有改善
增加洗脱液中离子强度,如0.1-0.2M NaCl
洗脱液中谷胱甘肽被氧化使用新鲜配制的洗脱液
加入DTT
非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱洗脱液中加入非离子型洗涤剂,如0.1%的Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20
电泳或Western Blot检测中发现多条带Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来Mr 70000蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK的产物,可以在目的蛋白中加入50mM Tris-HCl,2mM ATP,10mM MgSO4,pH7.4在37℃加热10min去除
可通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白
GST融合蛋白已经发生降解在裂解液中加入蛋白酶抑制剂,如加入1mM PMSF
可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的,可使用蛋白酶缺陷型宿主菌(如lon-ompT)
细胞破碎过度减少细胞破碎时间,超声前加入溶菌酶(菌液体积的0.1倍10mg/mL溶菌酶,25mM Tris-HCl,pH8.0),避免发泡导致蛋白酶变性,过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化。
共价共纯化包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化,如:DnaK(Mr~70000),DnaJ(Mr~37000),GrpE(Mr~40000),GroEL(Mr~57000),GroES(Mr~10000)
抗体与E.coli的各种蛋白反应抗体吸附E.coli蛋白:GST-抗体;超声处理去除GST抗体,可以用Western Blot检测

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